CARTA

Leemos con interés el artículo «Análisis de la secuencia del ARN ribosómico de la infección por Brucella identificada erróneamente como infección por Ochrobactrum anthropi» de Horvat y colegas (1 El artículo informó que un aislado de Brucella se identificó erróneamente como Ochrobactrum anthropi. Los resultados del ARNr 16S indicaron que los aislamientos eran especies de Brucella, con un 100% de concordancia con las secuencias de ARNr de brucelas conocidas y una baja homología con las secuencias de Ochrobactrum anthropi.

Nuestro laboratorio se ha encontrado con este tipo de circunstancias en tres ocasiones desde diciembre de 2011. Se aislaron cepas de hemocultivos de dos pacientes con fiebre sin causa aparente y de un cultivo de médula ósea de un paciente con lesión tibial izquierda, inicialmente identificadas como Bordetella bronchiseptica (1 caso) y Ochrobactrum anthropi (2 casos) a través del sistema de identificación microbiana Vitek 2 Compact y tarjeta de identificación Gram-negativa (GN). Como primer caso (m se identifica como Bordetella bronchiseptica) presentaba síntomas de brucelosis de esplenomegalia, transaminasas levemente elevadas, fiebre ondulante típica y un nivel de linfocitos significativamente elevado en su recuento de glóbulos blancos, se realizó la amplificación y secuenciación por PCR del ARNr 16S y los resultados se analizaron utilizando GenBank (números de acceso ACBJ01000075 .1, ACEM01000005.1, NC_013118.1 y NC_009668.1). Los resultados indicaron que el nivel más alto de identidad fue con Brucella abortus, Brucella melitensis y Brucella microti entre las Brucella spp., Así como con Ochrobactrum anthropi ATCC 49188 (cobertura de la consulta, 100%; identidad máxima, 99%). Sin embargo, Ochrobactrum anthropi podría excluirse en base a un resultado negativo observado en la prueba de motilidad semisólido-medio y tinción flagelar. Los resultados sugieren que el sistema automático de identificación microbiana no es confiable, por lo que dos cepas conservadas identificadas como Ochrobactrum anthropi por la prueba de Vitek fueron subcultivadas y reevaluadas. Se realizaron la amplificación, secuenciación y alineación por PCR de ARNr 16S. Los resultados fueron similares a los de la primera cepa; es decir, la mayor identidad fue para varios aislados dentro de Brucella spp. y Ochrobactrum anthropi. Aquí nuevamente, Ochrobactrum anthropi fue excluido en base a un resultado negativo de la prueba de motilidad semisólido-medio y tinción flagelar. También realizamos la prueba que utilizó PCR en tiempo real seguida de análisis de curva de fusión de alta resolución (HRM) para identificar las cepas de Brucella. Fueron identificados como Brucella melitensis. Las tres cepas fueron confirmadas como Brucella melitensis por el CDC de China, y los sueros de los pacientes fueron positivos para el anticuerpo de Brucella usando la prueba de microaglutinación de Brucella. Estas tres tinciones fueron serotipadas como biovar tipo I.

Brucella es un potencial agente de bioterrorismo y también un patógeno significativo que causa infecciones adquiridas en el laboratorio (2, 3). Sin embargo, la identificación errónea de las especies de Brucella por algunos sistemas comerciales de identificación bacteriana se ha informado anteriormente (4, 5). Debido a estas identificaciones erróneas recurrentes, cada vez más Los laboratorios ahora confían en métodos moleculares para identificar Brucella. Además del informe de Horvat y sus colegas, los estudios de Gee et al. han demostrado que la secuencia consenso de ARNr 16S de la especie Brucella, generada después de que se secuenciaron 65 cepas de Brucella de 6 especies, se compartieron 100% de identidad con 11 secuencias de genes de ARNr de Brucella 16S en GenBank, incluida la cepa 16M de B. melitensis y la cepa 1330 de B. suis (6). Estos resultados indican que El método de secuenciación del gen 16S rRNA es un medio eficaz para identificar clínicamente bacilos gramnegativos de crecimiento lento, pero tenemos serias preocupaciones relacionadas con la ausencia total de homología con Ochrobactrum anthropi en comparación con la coincidencia del 99% con Brucella spp. o las cepas de Ochrobactrum anthropi (incluida la cepa ATCC) informadas aquí. ¿Esto está asociado con el uso de diferentes bases de datos (SmartGene versus GenBank)? Esperamos una respuesta de Horvat y sus colegas para hacer un mejor uso del análisis de la secuencia del ARNr 16S para identificar bacterias de crecimiento lento como Brucella melitensis.