CARTA

Lemos com interesse o artigo “Análise da sequência de RNA ribossomal da infecção por Brucella Misidentified as Ochrobactrum anthropi Infection” por Horvat e colegas (1 ). O trabalho relatou que um isolado de Brucella foi identificado incorretamente como Ochrobactrum anthropi. Os resultados de rRNA 16S indicaram que os isolados eram espécies de Brucella, com 100% de concordância com sequências de rRNA de brucelas conhecidas e baixa homologia com sequências de Ochrobactrum anthropi.

Nosso laboratório encontrou essas circunstâncias três vezes desde dezembro de 2011. As cepas foram isoladas de hemoculturas de dois pacientes que sofriam de febre sem causa aparente e de uma cultura de medula óssea de um paciente com lesão na tíbia esquerda, inicialmente identificadas como Bordetella bronchiseptica (1 caso) e Ochrobactrum anthropi (2 casos) através do sistema de identificação microbiana Vitek 2 Compact e cartão de identificação Gram-negativo (GN). Como o primeiro caso (m isidentificada como Bordetella bronchiseptica) teve sintomas de brucelose de esplenomegalia, transaminase levemente elevada, febre ondulante típica e um nível de linfócitos significativamente elevado em sua contagem de leucócitos, 16S rRNA PCR amplificação e sequenciamento foram realizados e os resultados foram analisados usando GenBank (números de acesso ACBJ01000075 .1, ACEM01000005.1, NC_013118.1 e NC_009668.1). Os resultados indicaram que o maior nível de identidade foi para Brucella abortus, Brucella melitensis e Brucella microti entre as Brucella spp., Bem como Ochrobactrum anthropi ATCC 49188 (cobertura da consulta, 100%; identidade máxima, 99%). No entanto, Ochrobactrum anthropi pode ser excluído com base em um resultado negativo observado no teste de motilidade em meio semissólido e na coloração flagelar. Os resultados sugerem que o sistema de identificação microbiana automatizado não é confiável, então duas cepas preservadas identificadas como Ochrobactrum anthropi pelo teste de Vitek foram subcultivadas e reavaliadas. 16S rRNA PCR amplificação, sequenciamento e alinhamento foram realizados. Os resultados foram semelhantes aos da primeira cepa; i.e., a identidade mais elevada foi para vários isolados dentro de Brucella spp. e Ochrobactrum anthropi. Aqui, novamente, Ochrobactrum anthropi foi excluído com base em um resultado negativo do teste de motilidade em meio semissólido e coloração flagelar. Também realizamos o teste que utilizou PCR em tempo real seguido de análise da curva de fusão de alta resolução (HRM) para identificar as cepas de Brucella. Eles foram identificados como Brucella melitensis. Todas as três cepas foram confirmadas como Brucella melitensis pelo China CDC, e os soros dos pacientes “foram positivos para anticorpos de Brucella usando o teste de microaglutinação de Brucella. Essas três manchas foram sorotipadas como biovar tipo I.

Brucella é um potencial agente de bioterrorismo e também um patógeno significativo que causa infecções adquiridas em laboratório (2, 3). No entanto, a identificação incorreta de espécies de Brucella por alguns sistemas de identificação bacteriana comercial foi relatada anteriormente (4, 5). Devido a essas identificações incorretas recorrentes, mais e mais laboratórios agora estão confiando em métodos moleculares para identificar Brucella. Além do relatório de Horvat e colegas, estudos de Gee et al. mostraram que a sequência de consenso 16S de rRNA da espécie Brucella, gerada após 65 cepas de Brucella de 6 espécies foram sequenciadas 100% de identidade com 11 sequências de genes de rRNA de Brucella 16S no GenBank, incluindo B. melitensis cepa 16M e B. suis cepa 1330 (6). Estes resultados indicam que o método de sequenciamento do gene 16S rRNA é um meio eficiente de identificar clinicamente bacilos Gram-negativos de crescimento lento, mas temos sérias preocupações relacionadas à completa ausência de homologia com Ochrobactrum anthropi em comparação com 99% de compatibilidade com Brucella spp. ou as cepas Ochrobactrum anthropi (incluindo a cepa ATCC) relatadas aqui. Isso está associado ao uso de diferentes bancos de dados (SmartGene versus GenBank)? Esperamos uma resposta de Horvat e colegas para fazer melhor uso da análise de sequência de rRNA 16S para identificar bactérias de crescimento lento, como Brucella melitensis.