LETTER

Am citit cu interes lucrarea „Analiza secvenței ARN ribozomal a infecției cu Brucella identificată greșit ca Ochrobactrum anthropi Infection” de Horvat și colegii (1) Lucrarea a raportat că un izolat de Brucella a fost identificat greșit ca Ochrobactrum anthropi. Rezultatele 16S rRNA au indicat faptul că izolatele erau specii Brucella, cu acordul 100% la secvențele de ARNr de brucellae cunoscute și omologie scăzută la secvențele de Ochrobactrum anthropi.

aboratorul nostru a întâlnit astfel de circumstanțe de trei ori din decembrie 2011. Tulpinile au fost izolate din hemoculturi a doi pacienți care sufereau de febră fără cauză aparentă și dintr-o cultură de măduvă osoasă a unui pacient cu leziune tibială stângă. Au fost identificate inițial ca Bordetella bronchiseptica (1 caz) și Ochrobactrum anthropi (2 cazuri) prin sistemul de identificare microbiană Vitek 2 Compact și cardul de identificare Gram negativ (GN). Ca primul caz (m este identificat ca Bordetella bronchiseptica) a prezentat simptome brucelozice de splenomegalie, transaminază ușor crescută, febră tipică undulantă și un nivel semnificativ crescut de limfocite în numărul său de globule albe, 16S rRNA PCR amplificare și secvențiere au fost efectuate și rezultatele au fost analizate folosind GenBank (numere de acces ACBJ01000075 .1, ACEM01000005.1, NC_013118.1 și NC_009668.1). Rezultatele au indicat că cel mai înalt nivel de identitate a fost pentru Brucella abortus, Brucella melitensis și Brucella microti din Brucella spp., Precum și pentru Ochrobactrum anthropi ATCC 49188 (acoperire interogare, 100%; identitate maximă, 99%). Cu toate acestea, Ochrobactrum anthropi ar putea fi exclus pe baza unui rezultat negativ observat în testul de motilitate semisolid-mediu și colorare flagelară. Rezultatele sugerează că sistemul automat de identificare microbiană nu este fiabil, astfel încât două tulpini conservate identificate ca Ochrobactrum anthropi prin testul Vitek au fost subculturate și reevaluate. S-au efectuat amplificarea, secvențierea și alinierea PCR ARNr 16S. Rezultatele au fost similare cu cele pentru prima tulpină; adică cea mai înaltă identitate a fost pentru mai multe izolate din Brucella spp. și Ochrobactrum anthropi. Din nou, Ochrobactrum anthropi a fost exclusă pe baza unui rezultat negativ din testul de motilitate semisolid-mediu și colorare flagelară. De asemenea, am efectuat testul care a utilizat PCR în timp real urmat de analiza curbei de topire de înaltă rezoluție (HRM) pentru a identifica tulpinile Brucella. Au fost identificați ca Brucella melitensis. Toate cele trei tulpini au fost confirmate ca Brucella melitensis de China CDC, iar pacienții „serurile au fost pozitive pentru anticorpul Brucella utilizând testul de microaglutinare Brucella. Aceste trei pete au fost serotipizate ca biovar tip I.

Brucella este un potențial agent de bioterorism și, de asemenea, un agent patogen semnificativ care provoacă infecții dobândite în laborator (2, 3). Cu toate acestea, identificarea greșită a speciilor Brucella de către unele sisteme comerciale de identificare a bacteriilor a fost raportată anterior (4, 5). Datorită acestor identificări greșite recurente, din ce în ce mai multe laboratoarele se bazează acum pe metode moleculare pentru a identifica Brucella. În plus față de raportul lui Horvat și colegii săi, studiile Gee și colab. au arătat că secvența consensului 16S rRNA din speciile Brucella, generată după ce 65 de tulpini Brucella din 6 specii au fost secvențiate, partajate Identitate 100% cu 11 secvențe genice ARNr Brucella 16S în GenBank, inclusiv tulpina B. melitensis 16M și tulpina B. suis 1330 (6). Aceste rezultate indică faptul că metoda de secvențiere a genei ARNr 16S este un mijloc eficient de identificare clinică a bacililor Gram negativi cu creștere lentă, dar avem îngrijorări serioase legate de absența completă a omologiei cu Ochrobactrum anthropi în comparație cu potrivirea de 99% cu Brucella spp. sau tulpinile Ochrobactrum anthropi (inclusiv tulpina ATCC) raportate aici. Este asociat acest lucru cu utilizarea diferitelor baze de date (SmartGene versus GenBank)? Așteptăm cu nerăbdare un răspuns de la Horvat și colegii săi, pentru a folosi mai bine analiza secvenței ARNr 16S pentru a identifica bacteriile cu creștere lentă, cum ar fi Brucella melitensis.